Univerzita P. J. Šafárika v Košiciach >> Prírodovedecká fakulta >> Ústav chemických vied
Katedra
Výskum
Štúdium
Aktuality
[ english ]
Pracovisko biochémie a štruktúrnej analýzy biomakromolekúl
O pracovisku | Kruhový dichroizmus | Príprava vzoriek | Aplikácie
Príprava vzoriek
Pre dosiahnutie najlepšieho pomeru signál/šum meraná látka by mala mať absorpciu v rozsahu 0.7-0.8. Nižšia, ako aj vyššia absorpcia má za následok zhoršenie tohoto pomeru.
Na kvalitu meraného spektra má veľký vplyv výber vhodného solventu, ktorý by mal mať nasledujúce vlastnosti:
- dobre solubilizovať meranú látku,
- priehľadnosť v meranej oblasti spektra,
| Absorpcia rôznych solí a tlmivých roztokov v ďalekej UV oblasti (Franz X. Schmid "Spectral methods of characterizing protein conformation and conformational changes" pp. 251-285, in Protein Structure a practical approach, Ed. T.E. Creighton, IRL Press at Oxford University Press, 1989) | ||||||
| Soľ/tlmivý roztok | Neabsorbuje nad | Absorbancia 0.01M roztoku v 0.1 cm kyvete pri | ||||
| 210 nm | 200 nm | 190 nm | 180 nm | |||
| NaClO4 | 170 nm | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| NaF, KF | 170 nm | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Boric acid | 180 nm | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| NaCl | 205 nm | 0 | 0.02 | >0.5 | >0.5 | |
| Na2HPO4 | 210 nm | 0 | 0.05 | 0.3 | >0.5 | |
| NaH2PO4 | 195 nm | 0 | 0 | 0.01 | 0.15 | |
| Na-acetate | 220 nm | 0.03 | 0.17 | >0.5 | >0.5 | |
| Glycine | 220 nm | 0.03 | 0.1 | >0.5 | >0.5 | |
| Diethylamine | 240 nm | 0.4 | >0.5 | >0.5 | >0.5 | |
| NaOH | pH 12* | 230 nm | >0.5 | >2 | >2 | >2 |
| Boric acid, NaOH | pH 9.1 | 200 nm | 0 | 0 | 0.09 | 0.3 |
| Tricine | pH 8.5 | 230 nm | 0.22 | 0.44 | >0.5 | >0.5 |
| Tris | pH 8.0 | 220 nm | 0.02 | 0.13 | 0.24 | >0.5 |
| Hepes | pH 7.5 | 230 nm | 0.37 | 0.50 | >0.5 | >0.5 |
| Pipes | pH 7.0 | 230 nm | 0.20 | 0.49 | 0.29 | >0.5 |
| Mops | pH 7.0 | 230 nm | 0.10 | 0.34 | 0.28 | >0.5 |
| Mes | pH 6.0 | 230 nm | 0.07 | 0.29 | 0.29 | >0.5 |
| Cacodylate | pH 6.0 | 210 nm | 0.01 | 0.20 | 0.22 | |
*Tlmivé roztoky boli titrované s 1M NaOH alebo 0.5 M H2SO4 na indikované hodnoty pH.
- opticky neaktívna,
- nesmie nevhodne ovplyvňovať vlastnosti študovanej látky.
Pre orientáciu uvádzame optické vlastnosti niektorých bežných rozpúšťadiel (podľa CD ORD Measurement manual, Jasco Corporation, Tokyo, Japan, December 1995):
| Solvent | Dolný limit (vlnová dĺžka) využitia solventu pre kyvetu s uvedenou dĺžkou optickej dráhy | Poznámky | ||
| 1 cm | 1 mm | 0.1 mm | ||
| n-hexane | ~210 | ~185 | ~180 | nepolárny |
| cyclohexane | ~210 | ~185 | ~180 | nepolárny |
| isooctane | ~210 | ~185 | ~180 | nepolárny |
| dioxane | ~220 | ~210 | ~202 | nepolárny, bežne používaný pre organické látky |
| benzene | ~280 | ~275 | ~270 | nepolárny, niekedy využívaný pre syntetické polyméry |
| carbon tetrachloride | ~250 | ~240 | ~230 | nepolárny |
| chloroform | ~240 | ~230 | ~220 | mierne polárny, využívaný pre porovnanie s NMR dátami |
| 1, 2-dichlorethane | ~220 | ~210 | ~200 | nepolárny |
| methanol | ~210 | ~195 | ~185 | polárny, bežne využívaný pre organické látky |
| ethanol | ~210 | ~195 | ~185 | polárny, bežne využívaný pre organické látky |
| trifluoroacetic acid | ~260 | ~250 | ~240 | meranie syntetických polymérov, korózny |
| dimethylsulfoxide | ~264 | ~252 | ~245 | meranie syntetických polymérov |
| tetrahydrofuran | ~220 | ~210 | ~204 | meranie syntetických polymérov |
| t-decalin | ~220 | pre merania pri vysokých teplotách (b.v. 194.6°C) | ||
| P5-M1 | ~220 | ~210 | isopentane/ methylcyclohexane (5:1) zmiešaný roztok, nepolárny roztok vhodný pre meranie pri nízkych teplotách (-196°C) | |
| EPA | ~220 | ~210 | ethylether/isopentane/ ethanol (5:5:2) zmiešaný roztok, bežne používaný pre meranie pri nízkych teplotách (-196°C) | |
| ethanol/methanol (4:1) | ~210 | ~200 | polárny roztok pre meranie pri nízkych teplotách (-196°C) | |
| distilled water | ~185 | ~180 | ~175 | |
| 10 mM sodium phosphate | ~182 | |||
| 0.1 M sodium phosphate | ~190 | |||
| 0.1 M sodium chloride | ~195 | |||
| 0.1 M Tris-HCl | ~200 | |||
| 0.1 M ammonium citrate | ~220 | |||
Spomienkový memorial Prof. Podhradského
Kontakt | Ústav | Fakulta | Univerzita
Copyright © 1990 - 2015 Univerzita P. J. Šafárika v Košiciach
Počet návštev: disabled